脲酶試劑盒作為生物化學檢測領域的核心工具，通過特異性催化尿素分解反應，廣泛應用于土壤氮素分析、食品添加劑檢測、臨床尿素氮測定等場景。本文基于某品牌脲酶試劑盒說明書，系統梳理其檢測原理、操作步驟、結果分析方法及注意事項，為科研與生產實踐提供標準化參考。
 

　　一、檢測原理：脲酶催化反應的定量轉化

　　脲酶（Urease，EC 3.5.1.5）是一種含鎳的金屬酶，可高效催化尿素水解生成氨和二氧化碳：

　　尿素 + H?O → 2NH? + CO?

　　試劑盒通過以下兩種技術路徑實現定量檢測：

　　1.酚-次氯酸鹽顯色法：氨與酚、次氯酸鹽反應生成藍色靛酚，吸光度值（630nm）與尿素濃度成正比；

　　2.谷氨酸脫氫酶偶聯法：氨參與谷氨酸脫氫酶催化反應，通過NADH消耗量間接測定尿素含量（適用于自動化生化分析儀）。

　　二、操作流程：標準化步驟與關鍵控制點

　　1.樣本前處理

　　①液體樣本（如血清、尿液）：12,000rpm離心10分鐘，取上清；

　　②固體樣本（如土壤、食品）：稱取0.5g加入10mL提取液（試劑盒提供），振蕩混勻后離心過濾。

　　2.孵育與檢測

　　①37℃水浴反應15分鐘（顯色法）或30分鐘（偶聯法）；

　　②顯色法需立即加入終止液，于630nm波長測定吸光度；

　　③偶聯法直接上機檢測，儀器自動計算結果。

　　三、結果分析與質量控制

　　1.標準曲線繪制

　　使用試劑盒配套的尿素標準品（0、1、5、10、20mmol/L）制作標準曲線，R²需≥0.995。

　　2.定量計算

　　①顯色法：尿素濃度（mmol/L）=（樣本OD值-空白OD值）/斜率

　　②偶聯法：儀器直接輸出結果，需驗證批間差異＜5%。

　　3.質控要求

　　①每批次檢測需同步測定低（2mmol/L）、高（15mmol/L）濃度質控品；

　　②允許范圍：低值質控品±0.5mmol/L，高值質控品±1.0mmol/L。

　　四、脲酶試劑盒注意事項與常見問題

　　1.干擾物質排除

　　①血清樣本中高濃度膽紅素（＞171μmol/L）或血紅蛋白（＞5g/L）需稀釋后重測；

　　②土壤樣本需避免含氮化肥污染，建議使用尼龍篩網過濾。

　　2.儲存條件

　　①脲酶工作液需-20℃分裝保存，避免反復凍融；

　　②顯色底物需避光保存，開封后4℃有效期為1個月。

　　3.故障排查

　　①無顯色反應：檢查脲酶工作液是否失效（可通過陽性對照驗證）；

　　②吸光度值偏低：確認樣本是否充分離心，排除顆粒物干擾。

　　脲酶試劑盒通過模塊化設計實現了檢測流程的標準化與結果的可靠性，但其準確性高度依賴操作規范性。建議用戶嚴格遵循說明書要求，定期參加室間質評以驗證檢測體系穩定性。隨著生物傳感技術的進步，未來脲酶試劑盒將向微型化、實時檢測方向演進，為現場快速分析提供更高效的解決方案。